Ana moteada 160

Los títulos ≥ 1:160 suelen indicar la presencia de LES activo, aunque ocasionalmente otras enfermedades autoinmunes pueden inducir estos títulos elevados. Actualmente se conocen grupos de pacientes de lupus con ANA negativos. Estos pacientes suelen tener anticuerpos contra el antígeno SS-A/Ro (normalmente cuando se utiliza un sustrato de sección congelada) y lupus cutáneo subagudo. El 10% de los pacientes con LES manifiestan pruebas biológicas falsas positivas para la sífilis; ésta puede ser incluso la manifestación inicial.

Otras pruebas utilizadas en la diferenciación de los estados autoinmunes son los anticuerpos contra el ADN de doble cadena, el factor reumatoide, los anticuerpos contra los antígenos nucleares extraíbles y el complemento hemolítico total (C3, C4, etc.). Aunque en ocasiones se solicitan pruebas de ANA en el líquido cefalorraquídeo o en el líquido sinovial, los ensayos actuales no están estandarizados para estos fluidos y dichos ensayos no aportan nada al proceso de diagnóstico.

Importancia clínica de los patrones de tinción de anticuerpos antinucleares y de los autoanticuerpos asociados

Las pruebas serológicas para detectar autoanticuerpos, incluidos los anticuerpos antinucleares (ANA) y los anticuerpos contra antígenos nucleares específicos, como el ADN de doble cadena (ADNd), desempeñan un papel importante en el diagnóstico de las enfermedades reumáticas sistémicas. Sin embargo, los resultados de las pruebas de autoanticuerpos por sí solos son insuficientes para establecer el diagnóstico de una enfermedad reumática sistémica. No debe realizarse ninguna prueba de autoanticuerpos sin una evaluación clínica que conduzca a un diagnóstico presuntivo.

El descubrimiento original de los ANA se basó en la inmunofluorescencia indirecta. La inmunofluorescencia (IFA) sigue siendo el método más utilizado para la detección de anticuerpos antinucleares. En este método, el suero diluido del paciente se incuba en un portaobjetos que contiene una monocapa de células epiteliales humanas. Si el anticuerpo está presente, se une a los núcleos celulares. Tras el lavado, el anticuerpo unido se detecta añadiendo IgG antihumana fluorescente. Las células positivas muestran una fluorescencia nuclear verde brillante con un patrón de tinción distinto. Las muestras de pacientes se analizan inicialmente en una dilución de 1:40 a 1:160. A continuación, se diluyen las muestras positivas y se informa del patrón de fluorescencia y del título. El título es la mayor dilución de suero que todavía muestra tinción nuclear inmunofluorescente.

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Lupus ana negativo

Para realizar el análisis de sangre de ANA, a veces denominado FANA (prueba de anticuerpos antinucleares fluorescentes), se extrae una muestra de sangre del paciente y se envía al laboratorio para su análisis. El suero de la muestra de sangre se añade a portaobjetos de microscopio que tienen células preparadas comercialmente en la superficie del portaobjetos. Si el suero del paciente contiene anticuerpos antinucleares, éstos se unen a las células (específicamente a los núcleos de las células) en el portaobjetos.

Un segundo anticuerpo, marcado comercialmente con un colorante fluorescente, se añade a la mezcla de suero del paciente y células preparadas comercialmente en el portaobjetos. El segundo anticuerpo (fluorescente) se adhiere a los anticuerpos del suero y a las células que se han unido. Cuando se observa el portaobjetos con un microscopio ultravioleta, los anticuerpos antinucleares aparecen como células fluorescentes.

El título se determina repitiendo la prueba positiva con diluciones en serie hasta que la prueba dé un resultado negativo. La última dilución que da un resultado positivo (es decir, la fluorescencia observada al microscopio) es el título que se comunica. He aquí un ejemplo:

Lupus sin ana

Quince laboratorios internacionales con experiencia en la realización de pruebas de ANA por inmunofluorescencia indirecta participaron en el análisis de sueros codificados de individuos sanos y de pacientes de los 5 grupos de enfermedades diferentes descritos anteriormente. Salvo la estipulación de que se utilizaran células HEp-2 como sustrato, cada laboratorio utilizó su propia metodología interna, de modo que cabe esperar que los datos reflejen la producción de una sección transversal de los laboratorios de referencia de ANA de todo el mundo. Los sueros se analizaron en 4 diluciones: 1:40, 1:80, 1:160 y 1:320.

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En los individuos sanos, la frecuencia de ANA no difería significativamente en los 4 subgrupos de edad que abarcaban los 20-60 años. En esta población supuestamente normal, el 31,7% de los individuos eran positivos a la dilución sérica 1:40, el 13,3% a la 1:80, el 5,0% a la 1:160 y el 3,3% a la 1:320. En comparación con los hallazgos entre los grupos de enfermedades, un punto de corte bajo a una dilución sérica de 1:40 (alta sensibilidad, baja especificidad) podría tener valor diagnóstico, ya que clasificaría a prácticamente todos los pacientes con LES, SSc o SS como ANA positivos. Por el contrario, un punto de corte positivo alto a una dilución sérica de 1:160 (alta especificidad, baja sensibilidad) sería útil para confirmar la presencia de la enfermedad sólo en una parte de los casos, pero probablemente excluiría al 95% de los individuos normales.

Por Aroa Flores

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